جهت مشاوره با شماره 09121223103 تماس حاصل فرمائید
محیط کشت سلولی RPMI

محیط کشت سلولی RPMI

  • 20کامنت
  • 2021/07/13
  • mohammad
  • 9

محیط کشت سلولی RPMI :

محیط کشت سلولی  RPMI توسط  E. Moore، Robert E. Gerner و H. Addison Franklin

در سال 1960 در موسسه یاد بود روز اول پارک یا Roswell Park Memorial Institute   ابداع شد .

محیط کشت RPMI مخفف عبارت Rosewall Park Memorial Institute 1640 است .

محیط کشت RPMI  محیط کشتی پیچیده است که برای رشد محدوده ی وسیعی از سلول های پستانداران به کارمی رود.

در ابتدا برای کشت سلول های لوسمی انسان ایجاد شد و سپس برای کشت سلول های هیبرید نیز به کار گرفته شد.

در صورت جایگزینی محیط کشت با سرم ، شرایط شناسایی لنفوسیت های B , T  انسانی ،

سلول های مغز استخوان و سلول های هیبریدوما در این محیط کشت رشد پیدا می کنند.

این محیط کشت محیط مناسبی برای رشد سلول های لنفوبلاستوئید در کشت معلق است.

همچنین برای کشت کارسینوما ( سلول های بدخیم اپیتلیال )  و آستروسیت ها ( سلول های نوروگلیای مغز ) و

حتی برای رشد لنفوسیت های انسانی نیز به کار می رود.

این محیط کشت نسبت به سایر محیط های کشت سلولی به علت وجود مقادیر زیادی فسفات ،

گلوتلتیون و همچنین مقادیر زیادی ویتامین منحصر به فرد است.

محیط کشت RPMI دارای 19 آمینو اسید ضروری و غیر ضروری است.

محیط کشت RPMI دارای کربن دی اکسید 5% است و سیستم بافری آن بی کربنات سدیم است.

اکثر محیط های کشت سلولی حاوی بی کربنات سدیم هستند.

بی کربنات موجود در محیط کشت به کمک گاز دی اکسید کربن وارد

شده به انکوباتور، سیسم بافری مناسب برای تنظیم ph محیط های کشت سلولی فراهم می کند.

میزان فشار گاز دی اکسید کربن توسط مانومتر دستگاه قابل تنظیم بوده و اکثرا روی 5% تنظیم می شود.

برای استفاده از محیط کشت در انکوباتور، ممکن است نیاز به میزان بیشتری از کربن دی اکسید باشد.

PH مورد نیاز برای این محیط کشت 8 است که نسبت به سایر محیط های کشت PH بالاتری دارد.

مهم ترین مرحله در کشت سلولی انتخاب محیط رشد مناسب برای کشت است که به حفظ PH و اسمولالیته کمک کند.

 

استفاده از سرم در محیط کشت :

به طور کلی استفاده از سرم ها در محیط های کشت سلولی پستاداران رایج است .

همچنین سرم به تنهایی سیستم بافری را تقویت می کند و از تغییرات PH جلوگیری می کند.

سرم ها مخلوطی پیچیده  از انواع مواد مغذی مانند پروتئین ها ، ویتامین ها ،  فاکتور رشد و

مواد بازدارنده می باشد و مواد مغذی را برای محیط کشت فراهم می کند.

سرم ها منبع غنی پروتئین هستند که شامل آلبومین ، فیبرونکتین ، فتوئین و آپروتینین هستند.

آلبومین پروتئین اصلی خون است که دارای بار منفی است و به نقل و انتقالات کمک می کند.

آلبومین به عنوان ماده ی پاک کننده ی محیط کشت از آلودگی ها نیز شناخته شده است.

رایج ترین سرمی که در محیط های کشت سلولی به کار می رود ،

FBS  یا سرم جنین گاوی است که مهم ترین علت آن وجود فاکتور های ضروری برای رشد و غنی بودن آن است.

لازم به ذکر است استفاده از FBS مقرون به صرفه بوده که برای تهیه محیط کشت بهینه است.

نکته ی حائز اهمیت آن است FBS ایمونوگلوبین های کمتری نسبت به سرم های دیگر دارد.

باید بدانیم از FBS در محیط RPMI نیز استفاده می کنیم که علت آن وجود فاکتور های رشد بیشتری نسبت به سایر سرم ها است.

ماندگاری محیط های کشت پس از افزودن مکمل ها تغیر می کند .

محیط های حاوی مکمل تمایل دارند سریع تر از محیط های پایه تخریب می شوند.

جهت کنترل کیفی و بهینه سازی میزان مصرف سرم ، باید آن را در غلظت های 2 تا 20 درصد به محیط کشت سلول ها افزود.

نکته ی قابل توجه در رابطه با سرم جنین گاوی یا FBS ، امکان آلودگی آن با عامل مولد جنین یا آنسفالوپاتی اسفنجی شکل گاوی است.

مواد تشکیل دهنده بر حسب میلی گرم در لیتر :

مواد تشکیل دهندهبر حسب میلی گرم بر لیتر
Calcium nitrate    (Ca(NO3)2 4H2O)   : 100/00100.00
Potassium chloride   (KCl) : 400/00400.00
Magnesium sulfate (MgSO4 ) : 48/8448.84
Sodium chloride  (NaCl) : 600/0006000
Sodium bicarbonate (NaHCO3) : 2000/002000
Sodium Phosphate (Na2HPO4) : 800/0001.00
Glucose : 2000/002000.00
Glutathione Reduced : 1/001.00
Phenol red : 5/305.00
AMINO ACIDS
L-Arginine : 2000/00200.00
L-Asparagine-H20 : 50/0056.80
L-Aspartic Acid : 20/0020.00
L-Cystine : 65/2050.00
L-Glutamic Acid : 20/0020.00
300.00
Glycine : 10/0010.00
L-Histidine : 15/0015.00
L-Hydroxyproline : 20/0020.00
L-Isoleucine : 50/0050.00
L-Leucine : 50/0050.00
L-Methionine : 15/0015.00
L-Phenylalanine : 15/0015.00
L-Proline : 20/0020.00
L-Serine : 30/0030.00
L-Threonine :20/0020.00
L-Tryptophan : 5/005.00
L-Tyrosine : 21/8420.00
L-Tyrosine : 21/8420.00
L-Valine : 20/0020.00
VITAMINS
Biotin : 0/200.20
Choline Chloride : 3/003.00
Folic Acid : 1/001.00
i-Inositol : 35/0035.00
Niacinamide : 1/001.00
p-Aminobenzoic Acid (PABA) : 1/001.00
Pyridoxine HCl : 1/001.00
Riboflavin : 0/200.20
Thiamine HCl : 1/001.00

برای کسب اطلاعات بیشتر به وبسایت capricorn مراجعه نمایید.

ما گاهی با اضافه کردن اسید های آمینه غیر ضروری نیز باعث بهبود رشد می شود.

مهم ترین اسید آمینه های ضروری برای سلول سیستئین و تیروزین می باشد.

 

گلوتامین

بسیاری از سلول ها برای بهبود رشد به گلوتامین نیاز دارند.

این سلول ها گلوتامین را به عنوان یک منبع کربن و انرژی به جای گلوکز استفاده می کنند که

اغلب به صورت محلول 200 میلی مولار تهیه شده و پس از فیلتراسیون در حجم های 10 میلی لیتر در 20- درجه نگهداری می شود.

گلوتامین معمولا در غلظت های نهایی 2 میلی مولار در لیتر به محیط کشت افزوده می شود.

این آمینواسید پس از افزوده شدن به محیط کشت حداکثر 3 هفته در دمای یخچال ( 4 درجه ) پایدار است.

گلوتامین یک آمینواسید ناپایدار و مهم  است که با گذشت زمان به شکلی تبدیل می شود که

توسط سلول قابل استفاده نیست و باید دقیقا قبل از استفاده به محیط اضافه شود.

گلوتامین منبع تامین کربن و نیتروژن در محیط است که تجمع آن باعث تجمع آمونیاک می شود و

آمونیاک نیز می تواند روی برخی از رده های سلولی اثر بگذارد.

پروتئین هایی نظیر آلبومین ، ترانسفرین ، فیبرونکتین اهمیت ویژه ای در محیط های کشت بدون سرم دارند.

بسیاری از ویتامین ها  برای رشد و تکثیر سلول ها ضروری است و توسط سلول ها قابل سنتز نیستند,

به همین خاطر از مکمل ها در محیط کشت باید استفاده کنیم.

همچنین ویتامین های گروه ب باعث تحریک رشد می شود.

به طور کلی درصورتی که PH محیط کشت اسیدی شود رنگ زردتر می شود و

در صورتی که قلیایی شود ارغوانی تر خواهد شد و در چنین شرایطی باید محیط کشت سلول با محیط تازه جایگزین شود .

زرد شدن محیط می تواند در اثر بالا بودن غلظت دی اکسید کربن انکوباتور ،

رشد بیش از حد سلول ها و یا آلودگی میکروبی باشد.

و برعکس ارغوانی تر شدن رنگ محیط می تواند در اثر کم بودن غلظت دی اکسید کربن محیط باشد که

محکم بستن در فلاسک ها و اتمام گاز دی اکسید کربن کپسول از دلایل مهم آن هستند.

 

شکل ظاهری :

محیط کشت به صورت محلول نارنجی رنگ دیده می شود.

شرایط نگهداری :

PH مورد نظر برای نگهداری محیط 7/3 ,   0/3 ± است.

جهت دریافت قیمتها لطفا به صفحه قیمت محیط کشت سلولی مراجعه نمایید.

همچنین میتوانید با کارشناسان ما تماس حاصل فرمایید.

  • شماره‌های تماس عبارتند از:
  • 44276021 –021
  • 44276022 –021
  • 44276023 –021
  • 44276024–021
  • 44276025 –021
  • 0912-1223103
  • 0902-4809888 (پیام در واتساپ)

 

برای امتیاز به این نوشته کلیک کنید!
[کل: 2 میانگین: 5]