توضیحات

محیط استرپتومایسین و پنی سیلین

محیط استرپتومایسین و پنی سیلین , محیط کشت سلولی مخلوط آنتی بیوتیکی است که به عنوان محیط کشت برای کنترل آلودگی های باکتریایی استفاده می شود.

لازم به یادآوری است که به محیط کشت سلولی Pen _ strep پنسترپ نیز  می گویند. رشد و بیوسنتز پنی سیلین توسط دو گونه پنی سیلیوم کریسوژنوم ۵۰۳۱ PTCC و ۵۰۳۳ PTCC در محیط کشت سنتزی بررسی شد.

لاکتوز با سرعت پایین تری تخمیر می شود اما برای تولید پنی سیلین قند مناسب تری است.

این محیط اولین بار در سال 1940 ابداع شد و ترکیبی از پنی سیلین G و استرپتومایسین است.

به طور کلی برای جلوگیری از رشد میکروارگانیسم ها در محیط کشت سلولی ،

باید از آنتی بیوتیک ها استفاده کنیم که بهترین آن ها استرپتومایسین و پنی سیلین

برای باکتری ها و آمفوتریپسین B برای قارچ ها است.

در صورت نیاز می توانیم به محیط کشت جنتامایسین

در غلظت 50 میکروگرم  اضافه کنیم تا طیف وسیع تری از باکتری ها را پوشش دهد.

یكي از مشكلات عمده آزمايشگاه هاي كشت سلولي كه اغلب به آن توجهي نمي شود

استفاده دائمي و روزمره از آنتي بيوتيك ها است.

مصرف مداوم آنتي بيوتيك ها در آزمايشگاه كشت سلولي ضروري نيست.

استفاده مداوم مي تواند باعث توليد سوش هاي مقاوم شود كـه ريشـه كني اين ميكروب ها مشكل تر بوده و

ممكن است نياز به آنتي بيوتيك هاي قوي تري داشـته باشد.

اين آنتي بيوتيك هاي قوي تر ممكن است براي خود سلول ها نيز سمي و مضـر باشـند.

یك نكته مهم اين است كه استفاده از آنتي بيوتيك ها ممكن است آلودگي هـاي انـدك را از چشم ما مخفي نگه دارد.

در چنين شرايطي حذف آنتي بيوتيك ها يا كاهش فعاليـت آنهـا در اثر اتمام نيمه عمرشان باعث بروز آلودگي خواهد شد.

البته در آزمایشگاه های کشت سلولی علاوه بر آلودگی میکروبی باید به آلودگی متقاطع سلول ها با یکدیگر نیز توجه کرد.

برای مثال تیره های سلولی تازه تهیه شده یک منبع مهم آلودگی متقاطع هستند.

مهم ترین علت آلودگی تیره های سلولی ، نامناسب بودن شرایط آزمایشگاهی است.

بررسی روزمره فلاسک های و سایر کنترل های روزانه اتاق کشت در حین سادگی باعث کشف سریع آلودگی ها می شود.

انواع آلودگی های میکروبی شامل :

1. آلودگی های باکتریایی و قارچی ،

2. آلودگی های مایکوپلاسما 

3. آلودگی های  ویروسی

در صورت رعایت اصول آسپتیک لازم نیست که همیشه به محیط کشت آنتی بیوتیک افزوده شود.

نکته ی حائز اهمیت این است که آنتی بیوتیک ها برای رشد بعضی از سلول ها خاصیت مهار کنندگی دارند و

در صورتی که مواردی از آلودگی دیده شد می توان از آنتی بیوتیک ها با طیف گسترده تر مانند

کانامایسین و دارو های ضد قارچ مانند آمفوتریپسین نیز استفاده کرد.

به طور کلی آنتی بیوتیک ها نباید هیچ گونه اثر سمی بر روی سلول ها داشته باشند .

آنتی بیوتیک :

ترکیباتی هستند که توسط میکروارگانیسم ها ( قارچ ها ، کپک ها و باسیلوس ها ) تولید ،

سبب کشتن و یا مهار رشد سایر میکروارگانیسم ها به جز میکروارگانیسم مولد می شوند.

بسیاری از آنتی بیوتیک ها نیز سنتتیک هستند و به طور مصنوعی ساخته می شوند.

منشا ژن های مقاومت انتی بیوتیک باکتری های مولد آنتی بیوتیک هستند.

این محلول در برابر انواع باکتری های گرم مثبت و گرم منفی عمل می کند.

به طوری که استرپتومایسین با اتصال به زیر واحد  S30ریبوزوم باعث مهار سنتز پروتئین در پروکاریوت ها می شود.

پنی سیلین جز آنتی بیوتیک های بتالاکتام بوده و با اثر بر روی سنتز دیواره ی سلولی باکتریایی اثر خود را می گذارد.

محیط کشت pen _ strep  حاوی ترکیبات زیر است :

نمک پنی سیلین :  1000 واحد در میلی لیتر

استرپتومایسین سولفات : 10 میلی گرم در میلی لیتر

توجه شود که محیط کشت به صورت مایع است و در دمای 20- درجه نگهداری شود.

برای حمل آن باید از یخ خشک استفاده کنیم.

نیمه عمر این محلول در دمای 37 درجه 3 روز است و بعد از 3 روز نگهداری در دمای 37 درجه کارایی خود را از دست می دهد.

همچنین برای آغاز کار باید محلول را از یخچال بیرون آورده و در بن ماری به دمای 37 درجه برسانیم.

می توانیم آنتی بیوتیک ها را قبل از فیلتراسیون به محیط اضافه کنیم.

باید توجه کرد که محیط های کشت و آنتی بیوتیک ها را نمی توان با اتوکلاو استریل نمود ولی

می توان آن ها را از فیلتر های 0/22  میکرو متر عبور داده و بدین ترتیب اکثر

میکروارگانیسم هایی را که باعث آلودگی محیط کشت می شوند را حذف کرد.

تنها ویروس ها و بعضی از مایکوپلاسما ها می توانند از فیلتر های مذکور عبور کنند.

برای تهیه و نگهداری محیط کشت فقط از ظروف شیشه ای درپیچ دار استفاده می شود.

این ظرف ها باید به خوبی با آب شسته شده و با آب مقطر دیونیزه آب کشی و

پس از خشک شدن با اتوکلاو استریل شده باشند.

در صورت استفاده از محیط های غلیظ آماده ، این محیط با آب مقطر دیونیزه استریل رقیق شوند.

جهت مشاهده انواع فیمت محیط کشت ها لطفا روی کلمه  لیست قیمت گیبکو  کلیک فرمایید.

همچنین از بازدید سایت  PAN  غافل نمانید!!!!

جهت اخذ مشاوره و خرید تجهیزات آزمایشگاهی با کارشناسان ما در هلدینگ KTG تماس حاصل بفرمایید.