توضیحات

محیط برد پارکر آگار

محیط برد پارکر آگار محیط کشتی انتخابی (علت انتخابی بودن این محیط، وجود تلوریت پتاسیم و کلرید  لیتیوم است)

و جامد که در اوایل دهه‌ی 1960 ابداع شده است که برای شناسایی استافیلوکوکوس های کواگولاز مثبت از آب، خاک و مواد غذایی بکار می‌رود.

محیط های حاوی مقادیر بالای Nacl به علت فراوانی به عنوان پلیت انتخابی جهت رشد استافیلوکوکوس اورئوس مورد استفاده قرار می‌گیرد

مانند محیط های مانیتول سالت آگار. ولی هیچکدام، از کیفیت محیط برد پارکر آگار برخوردار نیستند.

محیط کشت برد پارکر آگار دارای چندین مزیت از جمله انتخابی بودن بالا، وجود یک واکنش تشخیصی و توانایی بهبود سلول های صدمه دیده است.

محیط کشت برد پارکر آگار، موفق ترین و مناسب ترین محیط جهت شناسایی استافیلوکوکوس اورئوس است.

همچنین وجود سدیم پیروات برای رشد بهتر سلول های استافیلوکوکوس اورئوس ضروری است و

این نکته را در نظر بگیرید که وجود سدیم پیروات باعث افزایش بهره‌روی در محیط می‌شود.

برد پارکر آگار رشد استافیلوکوکوس اورئوس را امکانپذیر می‌کند و بطور انتخابی رشد اکثر میکروارگانیسم ها را مهار می‌کند.

استافیلوکوکوس اورئوس کوکسی گرم مثبت بی هوازی اختیاری است که

قادر به تولید انتروتوکسین است که می‌تواند مسمومیت های غذایی  ایجاد کند.

استافیلوکوکوک ها به دو دسته‌ی کواگولاز منفی و مثبت تقسیم می‌شوند که

مهم ترین استاف کواگولاز مثبت ، استافیلوکوکوس اورئوس است.

البته توجه کنید استاف های دیگری نیز وجود دارند که کواگولاز مثبت باشند اما از نمونه‌ی انسانی جدا نمی‌شود.

کواگولاز آنزیمی است که در تبدیل فیبرینوژن به فیبرین نقش دارد و در غیاب کلسیم موجب لخته شدن پلاسمای خون یا حیوان می‌گردد.

تولید این ترکیب منحصر به استافیلوکوکوس اورئوس نیست بلکه به وسیله‌ی

استافیلوکوکوس اینترمدیوس و استافیلوکوکوس هایکوس نیز تولید میگردد

بطور کلی در آزمایشگاه های تشخیص طبی، استافیلوکوکوس ها بر مبنای توانایی تولید آنزیم کواگولاز مورد شناسایی قرار می‌گیرند.

نکته‌ی قابل توجه این است که استافیلوکوکوس اینترمدیوس قادر به احیای تلوریت نیست و

بنابراین بر روی محیط برد پارکر آگار کلنی های سفید تولید می‌کند.

این نکته را به خاطر داشته باشید که با اضافه کردن مکمل rpf به محیط می توانیم باعث کاهش تلوریت پتاسیم

در محیط شویم زیرا بعضی از گونه ‌های استافیلوکوکوس به تلوریت حساس هستند.

همچنین این مکمل می‌تواند باعث رشد انتخابی قابل توجهی در محیط نسبت به

محیط کشت بدون مکمل شود که میزان بهره‌وری را افزایش می‌دهد.

اساس کار :

احیای تلوریت به وسیله‌ی استافیلوکوکوس اورئوس موجب ایجاد کلنی هایی به رنگ سیاه و براق می‌گردد که

این کلنی ها در نتیجه‌ی هیدرولیز پروتئین موجود در زرده‌ی تخم مرغ است که به‌ وسیله‌ی ناحیه‌‌ی روشن احاطه گردیده است.

لبه های داخلی کلنی ها اغلب به رنگ روشن و براق می‌باشد که این ویژگی نتیجه‌ی رسوب اسید های چرب است.

ظاهر کلنی ها بر روی محیط برد پارکر آگار موجب شناسایی احتمالی استافیلوکوکوس اورئوس می‌شود.

ایجاد کلنی های مشکی که توسط سودوموناس آئروژینوزا ایجاد شده است ،

نتیجه‌‌ی کاهش تلوریت در محیط است ایجاد کلنی های مشکی که توسط سودوموناس آئروژینوزا ایجاد شده است ،

نتیجه‌‌ی کاهش تلوریت در محیط است البته این کلنی ها بطور معمول توسط مناظق واضح و شفاف که در نتیجه‌ی پروتئولیز است احاطه شده اند.

تایید این کلنی ها اغلب به‌وسیله‌ی آزمون های تولید کواگولاز و نوکلئاز مقاوم حرارت صورت می‌گیرد.

استافیلوکوکوس اورئوس با مصرف تلوریت در محیط باعث ایجاد کلنی های خاکستری تا سیاه می‌شود.

ایجاد کلنی های مشکی که توسط سودوموناس آئروژینوزا ایجاد شده است ،

نتیجه‌‌ی کاهش تلوریت در محیط است البته این کلنی ها بطور معمول توسط

مناظق واضح و شفاف که در نتیجه‌ی پروتئولیز است احاطه شده اند.

همچنین  وجود دو آنزیم لسیتیناز و لیپاز در محیط به وسیله ‌اضافه کردن زرده‌ی تخم مرغ قابل شناسایی است.

محیط کشت برد پارکر آگار حاوی ترکیبات زیر است ( برحسب گرم در لیتر) :

عصاره ‌گوشت : 5/0

سدیم پیروات : 10/0

عصاره جو : 1/0

گلیسین : 12/0

لیتیوم کلراید : 5/0

آگار : 20/0

کازئین :10/0

PH نهایی در دمای 25 درجه 7/2 است.

مشخصات ظاهری :

محیط آماده : به صورت مایع و زرد رنگ و مات است.

محیط غیر آماده : به صورت پودر کرم رنگ است.

دستورالعمل استفاده :

6/3 گرم از پودر محیط کشت را در 1000 میلی لیتر آب مقطر از پیش آماده شده

در ارلن مایر ترکیب کرده و خوب بهم بزنید تا کاملا در آب حل شود.

سپس محلول را در بن ماری یا روی چراغ الکلی به مدت یک الی دو دقیقه حرارت دهید. (فقط توجه کنید که بیش از حد حرارت ندهید)

محلول را به مدت 15 دقیقه در اتوکلاو 121 درجه قرار داده و سپس اجازه دهید

در دمای 40 الی 50 درجه خنک شود و سپس 50 میلی لیتر زرده‌تخم مرغ به آن اضافه کنید و

سپس به آرامی آن را تکان داده تا کاملا مخلوط شود.

هم اکنون محلول را در پلیت های مورد نظر ریخته و آماده‌ی مصرف می‌باشد.

آماده کردن امولسیون زرده‌ی تخم مرغ :

تخم مرغ تازه را شستشو داده و سپس 2تا4 ساعت در الکل سفید خوابانده تا کاملا محتویات روی پوسته پاک گردد.

سپس توسط پنس استریل به میزان کمی سوراخ کرده و به تدریج سفیده بطور کامل از زرده جدا می‌گردد.

و بعد زرده را داخل مزور 250 میلی لیتری ریخته و به آن 10 میلی لیتر از محلول آماده‌سازی شده تلوریت پتاسیم را افزوده

و سپس برای ساخت یک لیتر از محلول برد پارکر آگار به آن تا حجم 50 میلی لیتری آب مقطر استریل افزوده می‌شود.

و توسط همزن استریل خوب مخلوط کرده و بعد به ظرف حاوی محلول اتوکلاو شده، بردپارکر افزوده و

روی همزن مغناطیسی کامل مخلوط کرده و در پلیت های شیشه‌ای در زیر هود به صورت استریل محتوا توزیع می‌شود و

پس از سرد شدن و بستن درب محیط لازم جهت کشت اختصاصی این باکتری آماده میگردد.

 

کنترل کیفیت :

استافیلوکوکوس اورئوسATCC25923 : به خوبی رشد می‌کند و کلنی ای به رنگ سیاه ایجاد می‌کند.

استافیلوکوکوس اپیدرمیس ATCC14990 : به خوبی رشد می‌کند و کلنی ای به رنگ سیاه ایجاد می‌کند.

اشرشیای کلای ATCC 8739 : رشد خیلی ضعیفی دارد و کلنی ایجاد می‌کند.

 

جهت مشاهده انواع فیمت محیط کشت ها لطفا روی کلمه لیست قیمت کلیک فرمایید.

همچنین از بازدید سایت شارلو غافل نمانید!!!!

جهت اخذ مشاوره و خرید تجهیزات آزمایشگاهی با کارشناسان ما در هلدینگ KTG تماس حاصل بفرمایید.