توضیحات

محیط مولر هینتون آگار

محیط مولر هینتون آگار یکی از بهترین محیط ها برای اندازه گیری حساسیت

میکروارگانیسم های سخت رشد به روش کربی بایر می باشد.

نشاسته موجود در محیط، سموم آزاد شده از باکتری ها را جذب کرده و مانع تداخل آن ها با انتی بیوتیک ها می شود.

مولر هینتون آگار Mueller hinton agar)  MHA )

مولر و هینتون در سال 1941 محیط کشت مولر هینتون آگار را به منظور جداسازی گونه های بیماری زا باکتری نیسریا ابداع کردند.

ترکیبات محیط کشت MHA

مواد تشکیل دهنده	گرم / لیتر
عصاره گوشتی	2.00 gm
اسید هیدرولیزات کازئین	17.50 gm
نشاسته	1.50 gm
آگار	17.00 gm
آب مقطر	1000 ml

PH نهایی محیط 1± 7.3 در دمای 25 درجه سانتی گراد

محیط مولر هینتون حاوی عصاره گوشت گاو، اسید هیدرولیزات کازئین، نشاسته و آگار است.

دو جزء عصاره گوشتی گاو و هیدرولیزات اسید کازئین در تامین نیتروژن، ویتامین ها، کربن، اسیدهای آمینه، گوگرد و

سایر مواد مغذی ضروری نقش دارند.

نشاسته جاذب متابولیت های سمی تولید شده است.

هیدرولیز نشاسته باعث تولید دکستروز می شود که به عنوان منبع انرژی عمل می کند و

آگار ماده ی جامد کننده ی محیط کشت است.

 فرمول تشکیل دهنده محیط کشت : 

• Beef Extract         
• Acid Hydrolysate of Casein
• Starch
• Agar 

استفاده از یک محیط مناسب برای بررسی حساسیت میکروارگانیسم ها به سولفونامیدها و تریموپریم ضروری است.

عملکرد سولفونامیدها با اسید پارا آمینوبنزوئیک PABA و آنالوگ های آن در تضاد است.

مقدار PABA و تیمین / تیمیدین در محیط مولر هینتون آگار به حداقل کاهش می یابد.

موارد استفاده از MHA

1. بیشترین کاربرد محیط مولر هینتون آگار برای آزمایش حساسیت آنتی بیوتیکی است.
2. این محیط به عنوان محیط استاندارد روش Bauer Kirby انتخاب شده است.
3. از این محیط می توان برای کشت نیسریا نیز استفاده کرد.

دلایل استفاده از محیط مولر هینتون آگار در تست حساسیت به آنتی بیوتیک ها :

1-محیط غیر انتخابی و غیر افترافی برای رشد همه باکتری هایی که بر روی این محیط، کشت داده میشوند.

2-محیط آگار نرم منجر به انتشار بیشتر آنتی بیوتیک ها نسبت به سایر پلیت ها شده و مناطق مهاری واقعی تر و بهتری ایجاد می شود.

3- کم بودن میزان مهار کننده مانند سولفونامیدها (sulfonamides) ,تریمتوپریم (Trimethoprim)و تتراسایکلین

کاربرد محیط کشت با 5% خون گوسفند :

streptococcus pneumoniae

Neisseria meningitidis

عواملی که در تست حساسیت آنتی بیوتیکی تاثیر میگذارند:

• غلظت دیسک ها
• انتشار دارو
• ساختار محیط کشت
• ضخامت محیط کشت
• ph محیط
• قدرت دیسک

آماده سازی MHA

1.  38 گرم از محیط را در یک لیتر آب مقطر حل کنید.
2. همراه با هم زدن مكرر، محیط را حرارت دهید. سپس به مدت یك دقیقه بجوشانید تا كاملاً حل شود.
3. محیط را به مدت 15 دقیقه در دمای 121 درجه سانتیگراد اتوکلاو کنید و اجازه دهید تا در دمای اتاق خنک شود.
4. مولر هینتون آگار خنک شده را در ظروف پتری دیش استریل بریزید و بر روی سطح افقی قرار داده تا عمق یکنواختی داشته باشد.
5. اجازه دهید تا در دمای اتاق خنک شود.
6. pH نهایی 1± 7/3 را در دمای 25 درجه سانتیگراد بررسی کنید.
7. محیط ها را می توانید در دمای 8-2 درجه سانتیگراد نگهداری کنید.

کننترل کیفی محیط مولر هینتون آگار:

کنترل مثبت	نتایج مورد انتظار
Escherichia coli ATCC® 25922	رشد خوب، کلنی های زرد کم رنگ
Pseudomonas aeruginosa ATCC® 27853	رشد خوب، کلنی های زرد رنگ
Staphylococcus aureus ATCC® 25923	رشد خوب، کلنی های کرم رنگ
کنترل منفی	نتایج مورد انتظار
محیط تلقیح نشده	عدم تغییر در محیط

ph محیط :

ph مناسب برای محیط حدودا 7/2 – 7/4 است , در ph پایین این محدوده تعدادی از آنتی بیوتیک ها فعالیت خود را از دست میدهند

مانند(aminoglycosides, quinolones, ( macrolides).

و سایر عوامل  محیط کشت (تتترا سایکلین ها ) دارای فعالیت بیش از حد میشوند و در ph های بالاتر اثرات متضاد اتنظار میرود .

محدودیت های محیط MHA

1. عوامل متعددی می توانند بر نتایج تست های انجام شده بر روی محیط تأثیر بگذارند:
2. میزان تلقیح، سرعت رشد، فرمولاسیون محیط ​​وpH . رعایت دقیق پروتکل برای اطمینان از کسب نتایج قابل اعتماد لازم است.
3. اگر رشد باکتری کند باشد، نیاز است تا مدت بیشتری در انکوباتور انکوبه شوند و
4. همین عامل می تواند سبب غیرفعال سازی دارو شود.
5. تغییر در غلظت کاتیون های دو ظرفیتی، در درجه اول کلسیم و منیزیم در نتیجه ی تست آمینوگلیکوزید،
6. تتراسایکلین و کولیستین بر روی ایزوله های باکتری P. aeruginosa تأثیر می گذارد.

غلظت تیمیدین و تیمین :

در صورتیکه محیط دارای غلظت بالایی از تیمین Thymine یا تیمیدین Thymidine باشد

بر روی اثر مهاری سولفونامید ها و تریمتوپریم  تاثیر گذاشته، در نتیجه منطقه مهاری کوچک شده یا

اصلا ایجاد نمیشود و منجر به نتایج مقاومت کاذب در گزارش ها شده  و

در نتیجه محیط کشتی که میزان تیمیدین آن کم است باید استفاده شود.

یون کلسیم و منیزیم :

افزایش یون های کلسیم و منیزیم در محیط کشت بر روی فعالیت امینوگلیکوزیدها (Aminoglycosides ) و

تتراسایکلین (Tetracycline) اثر گذاشته و باعث کوچک شدن قطر منطقه مهاری در P.aeruginosa میشود و

با افزایش یون های دوظرفیتی قطر منطقه مهاری کاهش می یابد.

رطوبت :

رطوبت زیاد بر روی صحت نتیجه، اثر به سزایی دارد؛

قبل از استفاده برای خارج کردن رطوبت اضافی باید  پلیت در داخل هود لامینار

به مدت 5 الی 10 دقیقه در دمای اتاق قرار داده شود و درب آن باز شود.

شما میتوانید برای خرید انواع محیط کشت های میکروبی  و سلولی و قیمت  محیط مولر  هینتون آگار

quelab به سایت شرکت کیمیا طب گستر مراجعه فرمایید.

اگر به دنبال بهترین کیفیت محیط کشت‌ها‌ی میکروبی و سلولی با نازل‌ترین قیمت‌ها از معتبرترین کمپانی‌ها هستید

جهت اخذ مشاوره و خرید تجهیزات آزمایشگاهی با کارشناسان ما در هلدینگ KTG تماس حاصل بفرمایید.