دستگاه ترموسایکلر چیست ؟

واکنش زنجیره‌ای پلیمراز یا (PCR (Poly Chain Reaction روشی است که به محققان اجازه می دهد تا به سرعت، نسخه‌های یک منطقه خاص از مولکول DNA را در شرایط آزمایشگاهی تکثیر کنند. این واکنش توسط دستگاه ترموسایکلر یا پی سی آر که یکی از تجهیزات مورد استفاده در بخش ژنتیک می‌باشد، انجام می‌شود.

مواد مورد نیاز برای پی سی آر

• الگو (Template) یا قطعه خالص از دو رشته‌ای از DNA که می‌خواهید آن‌ را کپی کنید.
• آغازگرها(Primers) یا مولکول‌های DNA مصنوعی کوتاه که یک دنباله DNA خاص را برای تکثیر هدف قرار می‌دهند.
• Taq DNA Polymerase  یا آنزیم مقاوم در برابر دما که برای کپی DNA استفاده می‌شود.
• نوکلئوتیدهای آزاد به عنوان واحد‌های ساختاری سازنده  DNA مورد استفاده آنزیم قرار گرفته و طویل سازی انجام می شود.
• ترموسایکلر(دستگاه PCR) یک دستگاه تخصصی است که به سرعت نمونه‌ها را گرم و سرد می‌کند.
• کاتیون‌های دو طرفیتی نظیر یون دوظرفیتی منیزیم که به عنوان کوآنزیم عمل می‌کنند.

چگونگی انجام پی سی آر

برای انجام (PCR (Poly Chain Reaction ، الگو که همان مولکول DNA می‌باشد با پرایمرها، آنزیم Taq پلیمراز و نوکلئوتیدها در ویال واکنش مخلوط می‌شود.

مخلوط واکنش تا دمای 94 درجه سانتیگراد به منظور واسرشتگی رشته DNA بالا می‌رود. (واسرشته سازی)

در مرحله بعد، دمای دستگاه تا 45 درجه سانتیگراد و 60 درجه سانتیگراد پایین می‌آید و به آغازگر یا همان پرایمر‌ها اجازه اتصال به ناحیه  مکمل خود بروی الگو را می‌دهد. ( اتصال)

در آخر، با افزایش دما تا 72 درجه سانتی گراد، دمای بهینه جهت شروع عملکرد آنزیم برای سنتز ایجاد می‌شود. ( طویل شدن)

رشته DNA در هر سیکل PCR (واسرشته سازی ، اتصال، طویل شدن) دو برابر می‌شود. به منظور تولید DNA کافی برای تجزیه و تحلیل، ممکن است بیست تا چهل چرخه مورد نیاز باشد.

به نکات زیر توجه فرمایید.

برای اضافه کردن هر ماده به ویال واکنش از سر سمپلرهای جداگانه استفاده کنید.

استوک یا منابع ذخیره مواد مورد استفاده را حتما در فریزر نگه داری کنید و هر چند وقت یکبار صحت آن‌ها را کنترل کنید.

قبل از استفاده از هر ماده، به منظور یکدست شدن ماده، از ورتکس استفاده کنید.

نمونه‌های کنترل منفی و مثبت را در کنار نمونه‌های آزمایش، در ژل الکتروفورز RUN کنید.

انواع مختلف روش‌های pcr  وجود دارند که کاربران برای اهداف مختلف با توجه به نیاز خود از آن‌ها استفاده می‌کنند. برای آشنایی بیشتر با این روش‌ها لینک زیر را کلیک کنید.

واکنش زنجیره‌ای پلیمراز 

دستگاه‌های پی سی آر خود به چند دسته تقسیم می‌شوند. شامل: پی سی آر معمولی ، پی سی آر گرادیانت و ریل تایم پی سی آر.

پی سی آر گرادیانت (Gradient PCR)

مشکلات مربوط به تکثیر یک قطعه DNA خاص با استفاده از PCR یک اتفاق روزمره در آزمایشگاه است.
تشکیل باندهای ثانویه غیر اختصاصی مانع تجزیه و تحلیل درست از نتایج PCR می‌شود.

در چنین مواردی، بهینه سازی شرایط PCR  با تغییرات زیر می‌تواند موثر باشد. این تغییرات شامل:

تیتراسیون غلظت منیزیم، الگو، آغازگر یا پرایمرها، dNT (دئوکسی نوکلئوتید)، آنزیم Taq، استفاده از روش‌هایی نظیر HOT start PCR و یا Touch down ، افزودن دترجنت‌ها ، کاهش سیکل‌های PCR یا افزایش تدریجی درجه حرارت انیل انجام می‌شود.

انتخاب درجه حرارت آنیل یا همان دمای اتصال پرایمرها به ناحیه مکمل خود در رشته الگو، احتمالاً مهمترین مؤلفه برای بهینه سازی واکنش PCR است. در بیشتر موارد‌، این دما باید به صورت تجربی آزمایش شود. PCR معمولاً در 5 درجه سانتیگراد زیر دمای محاسبه شده از نقطه ذوب آغازگر (TM) آغاز می‌شود.

تشکیل احتمالی باندهای ثانویه غیر اختصاصی نشان دهنده این است که دمای بهینه بسیار بالاتر از دمای محاسبه شده (> 12 درجه سانتیگراد) است. در این حالت استفاده از عملکرد گرادیانت دستگاه pcr توصیه می‌شود. این روش امکان تعیین دمای بهینه به صورت تجربی را با ایجاد یک شیب دمایی فراهم می‌کند.

ریل تایم پی سی آر (Real time PCR)

Real-time PCR مبتنی بر تشخیص فلورسنت تولید شده توسط یک مولکول گزارشگر می‌باشد. مقدار نور تولید شده با ادامه واکنش، افزایش می‌یابد. این امر به دلیل تجمع محصول PCR در هر چرخه می‌باشد. در این روش بر خلاف PCR معمولی و یا گرادیانت، برای مشاهده نتایج PCR نیاز به استفاده از روش هایی نظیر الکتروفورز نمی‌باشد.

برای اطلاع از قیمت‌ها فقط کافیست بروی صفحه لیست قیمت کلیک کنید.