ستون های HPLC

ستون های HPLC ،شامل 8 گونه مختلف ستون با طول های 30 تا 600 میلیمتر و قطرهای داخلی از 1 تا  80 میلیمتر که در آزمایشات مختلف تجزیه ای مورد استفاده قرار می گیرند . ستون های HPLC عبارتند از :

الف ) ستون های ®ChromCart:

با قابلیت اتصال کارتریج ها بدون ابزار می باشد و طیف گسترده ای از بسته های سلیکای ®NUCLEOGEL را پوشش می دهد .

ب ) ستون های ®Microbore:

مناسب برای کاربر در LC/MS،HPLC  بوده و آنالیز های سریع به همراه تفکیک پذیری و حساسیت بالایی را دارا می باشد.

ج) ستون های گونه EC :

بستر ژل در این ستون ها بوسیله صفحات ساندویچی فلزی و ورقه های الیاف شیشه ای مورد محافظت قرار گرفته است .

د) ستون های گونه Valco:

سخت افزار مربوط به این ستون ها در بسیاری از کشورها به خوبی شناخته شده است ، که کمپانی از آن در ستون هایی که بر مبنای پلیمر طراحی شده اند استفاده می کند .

ستون های این گونه دارای قطر های داخلی 4.6mm و 7.7mm و قطرهای خارجی “1/4 و “3/8 می باشند که در دسته دوم در ستون هایی مورد استفاده قرار می گیرند که به منظور جداسازی های به خصوص کاربرد دارند ، هر چند ، بنا به درخواست مشتری با هر نوع گستره از سیلیکاهای NUCLEOGEL® و ®NUCLEODUR قابل دسترسی هستند .

ه ) ستون PEEK :

اتصالات این ستون ها از سرامیک یا ترکیب PEEK /Teflon ساخته شده و برای آنالیزترکیبات حساس به فلزات یا جداسازی یون های فلزی توصیه می گردد .

و) ستون های Standard Prep:

این ستون ها از دسته Preparative Column  با قطرهای داخلی از 10تا 50/8 میلیمتر که اتصالات ستون بسته به قطر بوسیله پیچ و فرول انجام می گیرد و رنج وسیعی از  packings بنابر در خواست مشتری در این ستون ها قابل دسترسی است .

ز ) ستون های ®Vano prep:

این ستون ها قابلیت تنظیم اتصالات انتهایی را بصورت محوری دارا می باشند که به منظور تطابق با تغییرات بستر ژل انجام می پذیرد، در ضمن انتهای ستون با ترکیبی از یک صفحه فلزی و ورقه الیاف شیشه ای بصورت ساندویچی بسته شده است .

ی ) ستون های Eco Prep :

سخت افزار این گونه از ستونها با ستونهای  تجزیه ای EC مطابقت دارد. که این ستون ها جزء دسته Preparative Column با قطر های داخلی 8 یا 16 میلیمتر می باشند.

و همگی ستون ها به همراه تیوب های لوله های موئین از جنس استیل ضد زنگ می باشند . ضمنا هر ستون با یک کروماتوگرام مخصوص همراه است که هزاران آزمایش در زمینه های مختلف جداسازی موفقیت عملکرد این ستون ها را اثبات می کند.

ستون های HPLC

– ستون های (Gel Premeation Chromatography) GPC:

ستون های مربوط به حلال های غیر محلول درآب که از دو گونه سیلیکاژل تشکیل شده اند :

الف ) ستون های گونه ®NUCLEOGEL :

به منظور جداسازی مواد محلول در آب ( ماتریکس این ژل ترکیبی از پلی استایرن _ دی فنیل بنزن و حلال ستون تولوئن می باشد )

این ستون ها که جزو دسته ستون های تجزیه ای Valco هستند قابلیت جداسازی مواد نظیر مواد آلی با وزن مولکولی پایین ،

الیگومرها و چربی ها، پلیمر های مولکولی با وزن پایین در اندازه های 25 و 60 kdalton  و

پلیمرهای با وزن بالاتر از 50kdalton و پخش وزن مولکولی پلیمر ها را دارا می باشند .

ب) ستونهای گونه NUCLEODUR:

شامل سیلیکاهای کروی است که دارای خلوص (عاری از ناخالصیهای فلزی و سیلانولهای اسیدی سطحی ) ،

پایداری بالای فیزیکی و شیمیایی

(پایداری بسیار بالای مکانیکی حتی در فشارهای بالا و به حداقل رسیدن انحلال یا هیدرولیز در PH بسیار اسیدی به علت پایداری فوق العاده شیمیایی )

و قابلیت شارژ مجدد ( افزایش بیش از حد تراکم ستون یا شارژ بیش از حد آن تاثیری بر روی قدرت جداسازی ستون ندارد) می باشد .

• ستون های ژل مخلوط همراه با ستون های محافظ 7.7*5  mm
• استاندارهای پلیمری GPC شامل PMMA (پلی متیل متا کریلات ) و حلال های محلول در آب نظیر
• PEO( پلی اتیلن اکساید) و PEG (پلی اتلین گیکول ) می باشد .
• CLC Packing شامل جاذبهای کروماتوگرافی ستونی که سبب پایین آمدن هزینه اقتصادی ،
• کارکرد بالای ستون با وجود فشار هیدرواستاتیکی پایین ، روند عملکرد ساده ستون و
• پایین آمدن هزینه های مربوط به دستگاهوری شده است .

 وسایل و لوازم آماده سازی نمونه جهت استخراج فاز جامد :

• کاتریج های با نام تجاری CHROMAFIX® و ستون های شیشه ای به نام CHROMABOND® و CHROMABOND®LVو
• میکروتیتروپلیت های CHROMABOND® Multi 96
• فازهای استاندارد مربوط به استخراج فاز جامد که طیف وسیعی از رزین های جاذب و
• سیلیکاها را به همراه لوازم جانبی  مربوطه شامل می شود.
• فیلتر های ممبران با نام تجاری CHOROMBOND®به منظورخالص سازی نمونه
• دراندازه های 1.2،1.0،0.45،0.2میکرو متر و قطرهای 3،15،25 میلیمتر .
• ویالهای مربوط به استخراج فاز جامد ،اتو سمپلر و لوازم جانبی
• جهت دریافت اطلاعات بیشتر به وب سایت BIO-RAD  مراجعه فرمایید.

 کروماتوگرافی لایه نازک (TLC) :

• صفحات آماده استفاده ، همراه با سیلیکاژل استاندارد و لایه های آماده استفاده HPTLC
• به همراه نانو سیلیکا که متشکل از نانو پلیتهای همراه با لایه سیلیکای بسیار نازک می باشد .
• صفحات HPTLC ،  TLC به همراه لایه های سیلیکای مشخص نظیر C18 (صفحات فاز معکوس RP)
• لایه های آماده استفاده TLC به همراه آلومینیم اکساید ، سلولز ، پلی آمید و همچنین لایه های مخصوص TLC/HPTLC
• کاغذ های کروماتوگرافی به همراه ست کیت های آموزشی و لوازم جانبی
• جاذب های TLC جهت پوشش صفحات TLC نظیر جاذبهای سیلیکا ، آلومینیم اکساید ، پلی آمید ، پودر سلولز و شناساگرهای فلورسنت .
• ستون های موئین کروماتوگرافی گازی ( GC) ( با نام های تجاری OPTIMA® و PREMABOND® ) که
• به منظور کاربرد های ویژه ای نظیر جداسازی آمین ها ، هیدروکربن های هالوژن دار فرار ،
• دی اکسین ها و آفت کش ها مورد استفاده قرار می گیرند .
• ستون های غیر فعال ، فواصل بازداری و Untreated Capillaries
• واکنشگرهای مشتق سازی شده که این واکنشگرها از طریق روش های آسیلاسیون ،
• متیلاسیون ( آلکیلاسیون ) و سیلاسیون تولید می شوند .
• استاندارهای GC و لوازم جانبی شامل ستون های موئین ، اتصالات ستون های موئین GC ،
• لوازم جانبی Packed GC columns ، محصولات در زمینه اندازه گیری جریان گاز و
• خالص سازی مستقیم گاز و فرول های گرافیتی که تحمل گرایی تا دمای 450 C⁰ همرا با قابلیت استفاده مجدد را دارا می باشند .

ستون HPLC چیست؟

طول ستونهاي دستگاه حدود 30-10 سانتي متر است. و جنس آن از فولاد ضدزنگ است. پرمصرف ترين ستون C18 ، ODS آکتا دسيل سيلان است، ستونها را پس از اتمام كار بايد با محلولهاي شستشو دهنده شست.

اگر از بافرفسفات استفاده كرديم ستون را با آب و متانول و بعد با متانول خالص شستشو مي دهيم. فاز ثابت بصورت ذرات ريزي در داخل ستون قرار گرفته است كه بر اثر چسبيدن و پخش شدن اجزاء نمونه و عبور فاز متحرك جداسازي انجام مي شود.

نمونه ابتدا وارد گاردكالوم و بعد وارد ستون مي شود، گارد كالوم را پس از مدتي بايد عوض كرد، ODS اكتا دسيل سيلان گروههاي الكيل غيرقطبي زيادي دارد، فاز متحركي كه استفاده مي كنيم قطبي است. فاز متحرك و ماده پركننده ستون از نظر قطبيت بايد عكس هم باشند.

در HPLC امکان استفاده از فاز نرمال و معكوس هست. اگر فاز ثابت قطبي و فاز متحرك غيرقطبي باشد سيستم را فاز نرمال و در صورتي كه ستون غيرقطبي و حلال قطبي باشد. سيستم را فاز معكوس مي گويند.

مشتقات آلكيل سيلان و فنيل سيلان ايجاد ستونهاي غير قطبي مي كنند و معمولا ستون غير قطبي و فاز متحرك قطبي است. بنابراين از فاز معكوس استفاده می شود. جنس ستونها از فولاد ضدزنگ يا Stainless steel است.

انواع ستون :

1. ستون های کروماتوگرافی مایع
2. ستون های تجزیه ای
3. ستون های محافظ

• ستون های کروماتوگرافی مایع:

این نوع ستون ها معمولا از لوله های فولاد زنگ نزن با منفذ یکنواخت ساخته می شوند , گرچه لوله های شیشه ای یا جداره ضخیم نیز گاهی به کار می روند . لوله های شیشه ای با فشارهای کمتر از psi 600 محدود می شوند.

• ستون های تجزیه ای:

طول اکثر ستونهای کروماتوگرافی مایع ۱۰ تا ۳۰ سانتیمتر است. معمولا ستونها مستقیم اند و قطر داخلی ستونهای مایع اغلب ۴ تا ۱۰ سانتیمتر است و متداولترین ذرات پرکننده ها ۵ و ۱۰ میکرومتر است.

متداولترین ستون در حال کار این روزها , ستونی با طول ۲۵ میکرومتر پرشده است. این ستونها می توانند ۴۰۰۰۰ تا۶۰۰۰۰ بشقابک در متر دارد.

• ستون های محافظ:

اغلب یک ستون کوتاه محافظ قبل از ستون تجزیه ای به کار می رود تا با حذف نه تنها مواد آلاینده ها از حلالها , بلکه همچنین اجزای نمونه که بطور برگشت ناپذیر با فاز ساکن پیوند می دهند, عمر ستون تجزیه ای را افزایش دهد.

همچنین در این روش ستون محافظ برای سیر کردن فاز متحرک با فاز ساکن به کار می رود تا اتلاف این حلال در ستون تجزیه ای را به حداقل برساند. اندازه ذرات در ستون بزرگ است تا افت فشار را به حداقل برساند.

• انواع پر کننده های ستون:

1. پرکننده ذرات پوسته دار
2. پرکننده متخلخل