توضیحات
محیط کشت GC آگار:
محیط کشت GC آگار چیست و چه کاربردی دارد؟
شما از GC آگار چه میدانید؟
هدف از این مقاله شرح مختصر و مفید GC آگار و آشنایی با جنبه های مختلف آن است.
محیط کشت GC آگار چیست؟
محیط کشت GC آگار محیطی جامد و انتخابی است که برای شناسایی و جداسازی منگوکوک ها به ویژه نایسریا مننژیتیدیس بکار میرود.
همانطور که قبلا بار ها و بار ها گفتهایم وجود نیستاتین و آمفوتریپسین به خاصیت انتخابی محیط میافزاید.
بهتر است بدانیم با اضافه کردن خون لیز شده و یا هموگلوبین به محیط کشت GC آگار باعث ایجاد محیط کشتی غنی میشود.
GC آگار حاصل تغییراتی است که در محیط کشت مارتین تایر ایجاد شده است به گونهای که
در ابتدا از آنتیبیوتیک های ونکومایسین،کلیستین و نیستانین بعنوان مکمل در محیط کشت تایر مارتین استفاده میشد.
اما با ایجاد محیط GC آگار، از این آنتیبیوتیک ها بطور گسترده تر استفاده شد که مانع از رشد پروتئوس ها شود.
ونکومایسین از رشد باکتری های گرم مثبت، کلیستین از رشد باکتری های گرم منفی و نیستاتین از رشد قارچها جلوگیری میکند.
انواع محیط کشت برای تشخیص باکتری های منگوکوک کدام اند؟
محیط آگار شکلاتی که برای رشد این دو گونه باکتری مناسب است، ولی جداسازی آنها از این محیط،
به علت رشد باکتری های فلور طبیعی از گروه نایسریا، مشکل است.
محیط تایر مارتین که همراه با مواد غنیکننده میباشد و نیز در ترکیب آن، از سه نوع آنتیبیوتیک ونکومایسین،
کلیستین و نیستاتین برای جلوگیری از رشد باکتری های گرم مثبت، گرم منفی و قارچ ها استفاده شده است.
محیط GC آگار حاصل تغییراتی است که در محیط کشت مارتین تایر ایجاد شده است.
محیط NYC آگار که حاصل تغیراتی است که در محیط کشت مارتین تایر ایجاد شده است.
محیط مولر هینتون آگار که بطور معمول، برای آنتیبیوگرام بکار میرود، یک محیط غنی شده است و
بعضی از باکتری های مشکل پسند از جمله نایرسیا های بیماریزا هم در آن رشد میکنند.
بهترین محیط (اختصاصی ترین) برای جداسازی نایسریا ها محیط کشت مارتین تایر است که
حاوی هموگلوبین و آنتی بیوتیک های ونکومایسین، کلیستین و نیستاتین (VCN) میباشد.
منگوکوک چه نوع باکتری است؟
نایسریا مننژیتیدیس همان منگوکوک است که دیپلوکوک گرم منفی هستند. که به صورت دو کوکسی کنار هم و هوازی مطلق وجود دارد.
نایسریا های غیربیماریزا معمولا سخت رشد نیستند و در محیط های معمولی نیز قابلیت کشت دارند ولی
نایسریاهای بیماریزا معمولا سخت رشدند و نیاز به محیط کشت غنی شده و اختصاصی دارند.
نایسریا به همراه پنوموکوک عامل نزدیک به 80% مننژیت در بچه های خصوصا در نوزادان زیر دو ماه هستند.
این دو باکتری شایع ترین عوامل ایجاد کنندهی مننژیت در سن بیشتر از دو ماه تا کهن سالی هستند.
نایسریا مننژیتیدیس باعث ایجاد مننژیت تیپ یک،منگوکوکسمی( سپتیسمی)، عفونت های تنفسی، آرتریت، آندوکاردیت میشوند.
نمونه های مشکوک به منگوکوک باید سریعا بر روی محیط های لازم کشت داده شود.
این نکته را در نظر داشته باشید که در صورت تاخیر باید از محیط انتقالی( استوارت) استفاده شود.
کلنی های این باکتری پس از 24 ساعت بهصورت کوچک، خاکستری و شفاف و در قطری در حدود 1 میلیمتر دیده میشود.
محیط کشت GC آگار از چه موادی تشکیل شده است؟( برحسب میلیگرم-لیتر)
پپتون: 15
سدیم کلرید: 5
نشاسته ذرت: 1
دی پتاسیم هیدروژن فسفات: 4
پتاسیم دی هیدروژن فسفات: 1
آگار: 10
PHنهایی در 25 درجه 7/2 است.
وجود نشاستهی ذرت تضمین میکند که متابولیت های سمی تولید شده توسط نایسریا جذب میشوند.
بافر های فسفات برای جلوگیری از تغیرات PH ناشی از تولید آمیت که بر بقای ارگانیسم تاثیر میگذارد.
پپتون به عنوان منبع تامین آمینواسید های لازم برای محیط است.
سدیم کلرید نیز باعث حفظ تعادل اسمزی محیط میشود.
با اضافه کردن خون لیز شده به محیط کشت میتوان ویتامین ها و دیگر مواد مورد نیاز محیط را تامین کرد و
محیط را به محیط کشت غنی شده تبدیل کرد.
کنترل کیفیت محیط کشت GC آگار به چه صورت است؟
محیط کشت باید از نظر میزان رشد قابل قبول و یا خصوصیات مهار کنندگی، با میکروارگانیسم های کنترل مناسب بررسی شود.
هموفیلوس آنفولانزا ATCC19418: به خوبی رشدمیکند.
نایسریا گونورهآ ATCC19424 : به خوبی رشد میکند.
مشخصات ظاهری GC آگار چگونه است؟
محیط کشت غیر آماده به صورت پودر زرد رنگ مایل زرد است.
آماده سازی و طرز استفاده از GC آگار چگونه است؟
36 گرم از پودر محیط کشت را با ترازو اندازه بگیرید و سپس با 500 میلی آب مقطر ازپیش تعیین شده
در ارلن مایر ترکیب کنید و خوب بهم بزنید تا کاملا حل شود.
سپس محلول را به مدت یک الی دو دقیقه در بن ماری حرارت دهید تا کاملا حل شود.
فقط این نکته را در نظر داشته باشید که از حرارت دادن بیش از حد محلول جدا خودداری کنید.
سپس محلول را به مدت 15 دقیقه در اتوکلاو 121 درجه قرار دهید .
سپس خارج کنید و اجازه دهید در دمای 40 الی 50 درجه خنک شود .
سپس خون لیز شده را به آن اضافه کنید و آن را به خوبی هم بزنید تا کاملا ترکیب شود.
هماکنون محیط کشت آمادهی مصرف است و میتوانید در ظرف مورد نظرتان بریزید.
برای آمادهسازی GC آگار به این نکات توجه فرمائید:
مکمل های حساس به حرارت و گرما باید بعد از اینکه دمای محیط کشت به حدود 50 درجه رسید به آن اضافه شود.
مکمل را با رعایت شرایط آسپیک به محیط کشت اضافه نمود، خوب مخلوط کنید و
سپس در ظرف نهایی که از قبل استریل شده اند، تقسیم نمائید.
در پایان، من و همکارانم تمام سعی و تلاش خود را بکار گرفتیم تا هر آنچه را که میدانستیم با شما به اشتراک بگذاریم.
از تکتک شما عزیزان سپاسگزاریم که تا انتها همراه ما بوده اید.
بیصبرانه منتظر نظرات شما هستیم.
جهت مشاهده انواع فیمت محیط کشت لطفا روی کلمه لیست قیمت کلیک فرمایید.
همچنین از بازدید سایت شارلو غافل نمانید!!!!
جهت اخذ مشاوره و خرید تجهیزات آزمایشگاهی با کارشناسان ما در هلدینگ KTG تماس حاصل بفرمایید.
sobhani –
مطلب مفیدی بود