توضیحات

محیط ائوزین متیلن بلو

محیط ائوزین متیلن بلو  یا همان محیط کشت EMB , نخستین بار توسط دانشمندانی مانند

هولت  هریس و تاگ  برای شناسایی اشرشیای کلای از گونه های انتروباکتریاسه در 1916 ابداع شد.

اما بعد ها توسط لوین  در سال 1918 اصلاح شد و به شکل امروزی که بسیار کاربرد دارد تبدیل شد.

از این محیط کشت برای تمایز باسیل های گرم منفی روده ای استفاده می شود.

همچنین برای شناسایی ای کلای و انتروباکتریاسه آئورژینوزا نیز کاربرد دارد.

البته فراموش نکنیم که برای شناسایی باسیل های گرم منفی روده ای از محیط کشت مکانکی آگار نیز استفاده می شود که

مبنای تشخیص در آن همانند محیط کشت EMB تخمیر لاکتوز است.

همچنین از EMB در آزمایشات میکروبیولوژی آب آشامیدنی و فاضلاب نیز استفاده می شود.

لوین همچنان EMB  آگار را به همراه کلروتتراسیکلین و هیدروکلراید برای شناسایی سریع کاندیدا آلبیکنس پیشنهاد داد.

کاندیدا آلبیکنس می تواند پس از 24 تا 48 ساعت انکوباسیون و در دمای 37 درجه سانتی گراد انجام می شود.

محیط ائوزین متیلن بلو , محیط کشتی جامد ، انتخابی(وجود رنگ های ائوزین و متیلن باعث عملکرد انتخابی محیط می شود و

هم چنین باعث تمایز  میکروارگانیسم هایی که لاکتوز را تخمیر می کنند و آن هایی که لاکتوز را تخمیر نمی کنند.) و

افتراقی است که برای تشخیص ، کشت و جداسازی کلی فرم ها و کلی فرم های مدفوعی کاربرد دارد.

توجه شود که باکتری های گرم مثبت به علت وجود رنگ های آنیلین ( ائوزین و متیلن بلو )

توانایی رشد بر روی محیط EMB  آگار را ندارند.

( وقتی محیط اطراف کلنی اسیدی شود ، متیلن بلو از باکتری های گرم مثبت ( ائوزین به میزان کمتر ) جلوگیری می کند و

درحالیکه ائوزین تغییر رنگ می دهد به رنگ بنفش تغییر می کند. )

و همچنین باکتری های گرم مثبت و باکتری های گرم منفی سخت رشد در محیط EMB  آگار مهار می شوند

به طوری که آن ها با هم ترکیب می شوند و در PH اسیدی رسوب ایجاد می کنند. بنابراین به عنوان شاخص تولید اسید عمل می کنند.

اساس کار محیط کشت EMB آگار :      

انتروباکتریاسه ها یا باسیل های گرم منفی روده ای که از نظر پزشکی برای ما مهم هستند,

به دو گروه پاتوژن واقعی و پاتووژن فرصت طلب

(گروهی که فلور نرمال دستگاه گوارش محسوب می شوند و در شرایطی می توانند سبب تولید بیماری شوند)  تقسیم می شوند.

پاتوژن های واقعی مانند شیگلا ، سالمونلا و کلبسیا و پاتوژن های فرصت طلب  مانند :

پروتئوس ، کلبسیا و اشرشیای کلای.

همه ی آن ها توانایی تخمیر گلوکز را دارند ولی  توانایی تخمیر لاکتوز در گروهی از آن ها وجود داشته است.

خصوصیاتی که در طبقه بندی انتروباکتریاسه ها مهم است شامل :

 1 . از خصوصیاتی که در طبقه بندی انتروباکتریاسه ها اهمیت دارند مصرف لاکتوز است .

بر اساس این ویژگی دو گروه می شوند :

الف) گروهی که از لاکتوز استفاده می کنند و آن را تخمیر می کنند که به آن ها لاکتوز مثبت می گویند.

ب) گروه دیگر که توانایی تخمیر لاکتوز را ندارند و از آن استفاده نمی کنند که به آن ها لاکتوز منفی می گویند.

این پدیده در محیط کشتی به نام مکانکی آگار در آزمایشگاه قابل مشاهده است و

کلونی باکتری ها به رنگ صورتی نشان دهنده ی مصرف لاکتوز ( تولید اسید و متعاقب آن تغییر رنگ محیط رشد ) می باشد,

مانند اشرشیای کلای و انتروباکتر و کلبسیا.

2 . یکی دیگر از خصوصیات آن ها مقاومت به نمک های صفراوی می باشد.

به این ترتیب با اضافه کردن املاح صفراوی به محیط رشد ، این دسته از باکتری ها را از سایر باکتری های فلور نرمال جدا می کنیم,

مانند جداسازی شیگلا و سالمونلا از باکتری های فلور نرمال .

3 . آن هایی که لاکتوز را تخمیر می کنند ، در محیط کشت EMB  رشد می کنند و جلای فلزی سبز ایجاد می کنند.

مثلا با کشت مدفوع در این محیط ، این جلا ایجاد می شود که به علت حضور فلور نرمال ارزش ندارد.

مانند اشرشیای کلای که فلور نرمال است.

 

در محیط کشت EMB  ، باکتری های گرم مثبت رشد نمی کنند و این محیط می تواند

بین گرم منفی هایی که لاکتوز را تخمیر می کنند مانند اشرشیای کلای و

باکتری هایی که لاکتوز مصرف نمی کنند مانند شیگلا تمایز قائل شود.

برای تمایز بین باسیل های گرم منفی از رنگ کلنی های آن ها استفاده می کنیم به گونه ای که

1. باکتری هایی که کلنی های رنگی روی EMB ایجاد می کند لاکتوز مثبت هستند .

2. باکتری هایی که کلنی بی رنگ و شفاف روی EMB آگار ایجاد می کنند لاکتوز منفی هستند.

 

 

باکتری های گرم منفی که توانایی تخمیر لاکتوز را دارند ، با تخمیر لاکتوز و

درنتیجه تولید  اسید  PH  محیط کاهش پیدا می کند و با جذب آن توسط کلنی ها تغییر رنگ ( بنفش تیره )  مشاهده می شود.

آن هایی که توانایی تخمیر لاکتوز را ندارند کلنی های بی رنگ و شفاف ایجاد می کنند.

( توجه شود که با از بین بردن پروتئین ها ممکن است PH  افزایش پیدا کند و این اطمینان را می دهد که رنگ جذب نمی شود).

باکتری اشرشیای کلای یا ای کلای به طور اختصاصی روی محیط کشت EMB  رشد کرده و کلنی سبز رنگ با جلای فلزی ایجاد می کند.

( EMB  محیط کشت اختصاصی برای ای کلای است.)

توجه شود که روی محیط کشت EMB آگار هم تخمیر کنندگان لاکتوز مانند ای کلای  و هم

آن هایی که لاکتوز را تخمیر نمی کنند مانند سالمونلا و شیگلا رشد می کنند.

( البته توجه شود که برخی از گونه های سالمونلا و شیگلا روی محیط کشت EMB رشد نمی کنند.)

همچنین کلنی های ایجاد شده توسط انتروباکتریاسه آئورژینوزا بر روی این  محیط به رنگ قهوه ای قابل مشاهده است.

محیط کشت EMB  آگار حاوی ترکیبات زیر است ( گرم بر لیتر ) :

آگار 13/500

متیلن بلو 0/065

ائوزین  0/400

ساکازر 5/000

لاکتوز 5/000

دی پتاسیم فسفات2/000

پپتون 10

PH  نهایی در دمای 25 درجه 7/1 است.

پپتون به عنوان منبع کربن و نیتروژن و همچنین تامین کننده ی سایر مواد مغذی ضروری است.

آگار ایجاد کننده ی حالت جامد یا ژله ای مانند محیط می شود ،

لاکتوز و ساکارز با داشتن کربوهیدرات های قابل تخمیر منبع تامین کننده ی انرژی هستند ،

فسفات محیط را بافری می کند و ائوزین Y  و متیلن بلو به عنوان شاخص های افتراقی عمل می کنند.

آماده سازی محیط کشت EMB آگار :

37/5 گرم از پودر محیط کشت را در 1000 میلی لیتر آب مقطر سوسپانسیون شود

( اجازه دهید پودر کاملا در آب حل شود ) و در بن ماری گذاشته تا حرارت ببیند

( البته توجه شود از حرارت دادن بیش از حد خودداری کنید ) و سپس

در دمای 121 درجه و به مدت 15 دقیقه اتوکلاو کنید و سپس در دمای 60 درجه خنک شود

و آن را درون ظرف استریل بریزید و محیط کشت آماده مصرف است.

کنترل کیفیت :

ای کلای ATCC25922   : به خوبی رشد می کند و کلنی هایی به رنگ سبز با جلای فلزی ایجاد می کند.

سودوموناس آئروژینوزا ATCC27853  : کلنی بی رنگ ایجاد می کند.

 

برای اطلاع از  سایر محیط کشت های میکروبی  و همچنین قیمت محیط کشتها,

لطفا مطلب محیط کشت کیولب را مطالعه نمایید.

برای بدست آوردن اطلاعات بیشتر در مورد قیمت محیط کشت  به سایت شرکت کیمیا طب گستر مراجعه فرمایید

و لیست قیمت quelab  را مطالعه بفرمایید .

اگر به دنبال بهترین کیفیت محیط کشت‌ها‌ی میکروبی و سلولی با نازل‌ترین قیمت‌ها از معتبرترین کمپانی‌ها هستید

جهت اخذ مشاوره و خرید تجهیزات آزمایشگاهی با کارشناسان ما در هلدینگ KTG تماس حاصل بفرمایید.