توضیحات

محیط کشت تتراتیونات براث

محیط کشت تتراتیونات براث یا  TTB محیط کشتی مایع ، غنی و انتخابی می‌باشد که اولین بار توسط مولر کشف شد.

نکته‌ی حائز اهمیت این است که تحقیقات مولر ثابت کرد که گونه های انتروباکتریاسه‌ی تخمیر کننده‌ی لاکتوز

در محیط کشت تتراتیونات براث مهار می‌شوند.

 انتروباكترياسه ها

در روده انسان و حيوانات گروه بزرگي از باسيل‌هاي گرم منفي و بدون اسپور زندگي مي‌كنند كه

شامل خانواده انتروباكترياسه مي‌باشد مانند اشريشيا، شيگلا، سالمونلا، آنتروباكتر، كلبسيلا، سراشيا، پروتئوس‌ها و ….

که  در دام به عامل کلی باسیلوز در گوساله ها و بره ها _ کلی سپتی سمی در گوساله ، بره ها و

طیور و سالمونلا پلوروم ،گالیناروم (در طیور) ، سالمونلا دابلین (در گاو) ،سالمونلا آبورتوس اویس (عامل سقط در گوسفند و اسب)

پروتئوس ولگاریس و میرابیلیس(عامل عفونت ادراری و اسهال در سگ، اسب و گاو) و

کلبسیلا پنومونی (عامل ماستیت در گاو) و … اشاره کرد.

اين خانواده نامتناجنس‌ترين مجموعه از باسيل‌هاي گرم منفي را تشكيل مي‌دهند.

اينها به وسيله صفات بيوشيميايی از قبيل قابليت احياء نيترات و توليد نيتريت، تخمير گلوكز،

ايجاد اسيد و گاز، تست اكسيداز و رشد در مجاورت كلرور سديم شناسايي مي‌شوند.

همچنين باكتري‌هاي روده‌اي براساس تخمير قند لاكتوز به 2 دسته:

1- تخمير كننده لاكتوز (غير بيماريزا)مانند اشریشیا

2- عدم تخمير لاكتوز (بيماريزا) مانند سالمونلا  و شیگلا تقسيم مي‌شوند.

TTB:

بعد ها کامفن توانست طی تحقیقاتی که بر روی فرمول تتراتیونات براث انجام داد ،

این محیط را به محیط کشت غنی شده ای برای رشد سالمونلا تبدیل کند.

درحالیکه گونه های سالمونلا بدون هیچ گونه محدودیت در این محیط رشد می‌کنند.

علت وجود نمک های صفراوی ، مهار باسیل های گرم مثبت است.

البته وجود نمک های صفراوی و دئوکسی کوالات  برای به تاخیر انداختن رشد باسیل های گرم منفی به غیر از سالمونلا نیز کاربرد دارد.

توجه شود که محیط کشت تتراتیونات به دلیل داشتن نمک های صفراوی و محلول ید ،

باعث می‌شود که تنها باکتری هایی که قابلیت احیای تیتراتیونات را دارند در این محیط به خوبی رشد می‌کنند.

کاربرد :

از محیط کشت تتراتیونات براث برای شناسایی و شمارش سالمونلا از نمونه های آلوده ، فاضلاب و مواد غذایی استفاده می‌کنند.

انجمن بهداشت آمریکا تتراتیونات براث را برای شناسایی و تشخیص سالمونلا در نمونه های آلوده‌ی مواد غذایی و لبنیات توصیه کرد.

بد نیست بدانیم که تتراتیونات با محلول ید اضافه شده به یک محیط کشت غنی سازی شده‌‌‌ی انتخابی

می‌تواند محیط مناسبی برای کشت گونه های سالمونلا در مدفوع ، ادرار ، غذا ها و

دیگر موادی که مشکوک به حضور این ارگانیسم ها هستند باشد.

مواد تشکیل دهنده‌‌ی تتراتیونات براث (برحسب گرم-لیتر ) :

برلیانت گرین 9/60 (میلی گرم _لیتر )

نمک های صفراوی 4/78

سدیم تیوسولفات 30/30

سدیم کلراید 2/60

کلسیم کربنات 38/70

پپتون 8/60

عصاره جو 1/800

عصاره گوشت 0/900

محلول ضد میکروبی نوبیوسین 20 (میلی گرم-لیتر)

PH نهایی 8/0 ± 8/2 در دمای 25 درجه است.

پپتون به عنوان منبع تامین کننده‌ی نیتروژن است.

سدیم کلرید نیز باعث ایجاد تعادل اسمزی می‎‌شود.

عصاره جو و عصاره گوشت منبع اصلی تامین کننده‌ی ویتامین های گروه ب است.

سدیم تیوسولفات نیز غیر فعال کننده‌ی هالوژن ها می‌باشد.

کربنات کلسیم نیز محصولات اسیدی حاصل از تجزیه‌ی تتراتیونات را خنثی می‌کند.

همچنین به دلیل وجود کربنات کلسیم ، محلول تهیه شده با رسوب سفید دیده می‌شود.

دستور العمل استفاده از محیط :

44/6 گرم از پودر محیط کشت را در 1000 میلی لیتر آب مقطر از پیش آماده شده در  ارلن مایر سوسپانسیون کنید و

اجازه دهید کاملا در آب حل شود . سپس اجازه دهید یکی الی دو دقیقه محلول در بن ماری یا روی چراغ الکی حرارت ببیند.

سپس محلول ضد میکروبی نوبیوسین را به محلول اضافه کنید.

محلول را در دمای 121 درجه و به مدت 15 دقیقه اتوکلاو کنید و سپس اجازه دهید در دمای 40 الی 50 درجه خنک شود.

پس از خنک شدن محلول ، 20 میلی لیتر محلول ید به آن اضافه کنید.

(اضافه کردن ید به محیط کشت کمک می‌کند که تا زمینه های غنی سازی در آن ایجاد شود. )

این نکته را در نظر بگیرید که پس از اضافه کردن ید ، محلول را اصلا حرارت ندهید.

حال محلول را در ظرف مورد نظر استریل شده توزیع کرده و آماده‌ مصرف است.

لازم به یادآوری است که بهتر است محیط کشت تتراتیونات براث را همان روزی که تهیه کردیم ، استفاده کنیم.

مشخصات ظاهری :

محیط غیر آماده : پودری شکل است و به رنگ کرم دیده می‌شود.

محیط غیر آماده : مایع است و به رنگ سبز شفاف دیده می‌شود.

 کنترل کیفیت :

انتروکوکوس فکالیس : ATCC19433 کاملا مهار می‌شود.

انتروباکتریاسه ATCC25922 : کاملا مهار می‌شود.

سالمونلا تیفی موریوم : ATCC14028 به خوبی رشد می‌کند.

محيط‌هاي مخصوص انتروباكترياسه:

_ سلينت (Selenite-F) F و تترا تیونات:

يك محيط مايع (آبگوشت) مي‌باشد كه سالمونلاها در آن به خوبي رشد مي‌كند و محيط حاوي لاكتوز، تريپتوفان، سديم هيدروسلينت و… مي‌باشد

_ مك كانكي آگار ((Macconkey Agar:

 يك محيط افتراقي است كه حاوي لاكتوز، املاح صفراوي و كريستال ويوله مي‌باشد ,

مخصوص باكتري‌هاي گرم منفي روده‌اي است

در اين محيط باكتري‌هاي تخميركننده لاكتور مثل E.coli كلني صورتي و بقيه كلني‌هاي بي‌رنگ ايجاد مي‌نمايند.

_ (Eosin Methylene Blue Agar) EMB:

از محيط‌هاي افتراقي بوده و حاوي لاكتوز و ائوزين متيلن مي‌باشد كه باكتري E.coli كه تخميركننده لاكتوز مي‌باشد ,

در اين محيط كلني‌هاي به رنگ سبز با جلاي فلزي ايجاد مي‌كند .

در صورتي كه كلني‌هاي ايجاد شده توسط سالمونلا و شيگلا بي‌رنگ مي‌باشد.

_ (Triple sugar Iron Agar) TSI:

بسيار مورد استفاده قرار مي‌گيرد و حاوي 3 قند گلوكز، لاكتوز و سوكروز مي‌باشد،

همچنين حاوي فنل‌رد،سولفات‌فرو و تيوسولفات سديم است و به صورت شيب‌دار (Slant bar) آن را تهيه مي‌كنند.

حال اگر ميكروبي رشد كند در اثر تخمير قند توليد اسيد كند رنگ محيط زرد (A) و اگر در محيط توليد قليا كند رنگ محيط قرمز (ALK) مي‌شود

و اگر H2s آزاد كند محيط سياه مي‌شود و اگر توليد گاز کند (CO2 )باعث ايجاد حباب و يا پارگي محيط مي شود.

و براساس رنگ توليد در سطح و ته لوله آن را گزارش مي‌كنند .

توجه:

KIA نام محیطی مشابه TSI بوده با این تفاوت که در این محیط فقط 2 قند گلوکز و لاکتوز وجود دارد و

همچنین حاوی اندیکاتور فنل رد، پپتون،سدیم تیوسولفات و فریک آمونیوم سولفات می باشد.

بقیه مراحل مانند محیط TSI گزارش می گردد.

_ سيمون سيترات (Simmons Citrate Agar):

توانايي عده‌اي از ميكروب‌ها در مصرف ستيرات سديم به عنوان تنها منبع كربن براي شناسايي آنها استفاده مي‌شود.

اين محيط حاوي معرف برمومتيلن بلو مي‌باشد باكتري‌هايي كه حاوي آنزيم لازم هستند

با بازي نمودن محيط رنگ آن را به آبي تغيير مي‌دهند كه رنگ خود محيط سبز مي‌باشد.

(البته توصیه کردند اگر کلنی رشد کرد ولی حتی باعث تغییر رنگ محیط نشد باز مثبت تلقی کنید)

_ (SIM Medium) SIM:

براي ارزيابي حركت باكتري‌ها، تست توليد ايندول و توليد H2s به كار مي‌رود و

باكتري‌هايي كه حاوي آنزيم لازم براي توليد تريپتوفان هستند با معرف كوواكس توليد رنگ قرمز تا صورتي مي‌كنند و

ايندول مثبت محسوب مي‌شوند و آنهايي كه توانايي حركت دارند شبيه يك چتر در محيط پخش مي‌شوند و

آنهايي كه توانايي توليد H2s دارند محيط را سياه مي‌كنند.

آنهايي که هنگام  رشد در محيط توليد تريپتوفان مي‌كند با اضافه كردن معرف كوواكس رنگ صورتي تا قرمز توليد مي‌كند.(مانند اشریشیا کلی)

 _ Clark and Lups Medium) MR-VP يا(MR-VP Broth :

محيط VPMR حاوي گلوكز است و با تخمير آن اسيدهاي گوناگون توليد مي‌شود كه

با معرف متيل‌رد به رنگ قرمز تبديل مي‌شود و در محيط VP (وگس پروسكوئر) با مصرف گلوكز

ماده خاص استيل متيل كربينول توليد مي‌شود و با معرف آلفا (α) نفتول كمپلكس قرمز صورتي به وجود مي‌آورد.

ابتدا 6 قطره آلفا نفتول اضافه کرده زیرا این معرف تولید استن را تحریک می کند .

سپس 12 قطره KOH اضافه می شود(نسبت 2/1 ).

حال محیط را به مدت 15 دقیقه در حالت سکون قرار داده و انگاه نتیجه را قرائت می کنیم.

جهت مشاهده انواع فیمت محیط کشت ها لطفا روی کلمه لیست قیمت کلیک فرمایید.

همچنین از بازدید سایت شارلو غافل نمانید!!!!

جهت اخذ مشاوره و خرید تجهیزات آزمایشگاهی با کارشناسان ما در هلدینگ KTG تماس حاصل بفرمایید.