جهت مشاوره با شماره 09121223103 تماس حاصل فرمائید
محیط کشت استامید براث

محیط کشت استامید براث

  • 20کامنت
  • 2021/04/17
  • Admin
  • 79

محیط کشت استامید براث

محیط کشت استامید براث محیطی انتخابی، کم آب و مایع است.

(محیط کشت انتخابی محیطی است که با استفاده از ماده مهارکننده، به جز ارگانیسم مورد نظر، رشد باقی ارگانیسم ها را مهار می کند

و این محیط قابلیت رشد فقط یک ارگانیسم را دارد.)

استامید براث (آبگوشت استامید) طبق استاندارد برای بررسی آب و فاضلاب فرموله شده است.

نمونه های آب آزمایش شده از طریق فیلتر غشایی استر سلولز استریل می شوند که

این فیلتر ها به صورت غیر رسمی روی آنها قرار می گیرند و به مدت 48-24 ساعت

کلونی های تولید کننده پیوسیانین به عنوان سودوموناس آئروژینوزا مورد تائید قرار می گیرد

(کلونی های فلوئورسنت به  عنوان سودوموناس آئروژینوزا فرضی محاسبه می شوند.).

استامید براث توسط طیف گسترده ای از موجودات غیر تخمیر کننده استفاده می شود.

استامید تنها منبع نیتروژن و کربن است و با این حال مقدار کمی از ارگانیسم هایی که در محیط رشد میکنند،

استامید را تجزیه می کنند. استامید توسط فرایند آمین سازی (فعالیت آکریل آمیداز) قابل شناسایی است.

تخمیر  فرایند شیمیایی است که به وسیله آن مولکول هایی مانند گلوکز به صورت بی هوازی تجزیه می شوند.

لوئی پاستور شیمی دان و میکروبیولوژیست فرانسوی در قرن 19 از اصطلاح تخمیر به معنای محدود

برای توصیف تغییراتی که مخمر ها و سایر میکروارگانیسم ها در غیاب هوا رشد می کنند را بکاربرد. (بی هوازی)

انواع تخمیر

  • امبدن هایپرهوف (تخمیر گلوکز)
  • تخمیر همولاکتیک
  • تخمیر اسید پروپیونیک
  • تخمیر  اسیدی ( MR)
  • تخمیر بوتاندیول (VP)
  • تخمیر اسید بوتیریک
  • انترودنددروف (غیر الکلی)
  • فسفو گلوکونات (تخمیر هترولاکتیک)
  • تخمیر اسید های آمینه (واکنش Stecklan )

لیست باکتری های غیرتخمیرکننده

آسینتوباکتر ، بوردتلا ، آلکالیژنس ، بورخولدریا ، لژیونلا ، سودوموناس

تخمیر روندی منحصر به فرد است که در شناسایی انواع مختلف باکتری های  غیرتخمیر کننده مفید است.

این توانایی توسط ارگانیسم های گرم منفی مانند سودوموناس آئروژینوزا نشان داده شده است.

تجزیه استامید توسط میکروارگانسیم باعث آزاد سازی آمونیاک و در نتیجه باعث افزایشpH می شود.

قلیایی شدن (حاصل از تولید آمونیاک) باعث تغیر رنگ از قرمز نارنجی به قرمز بنفش می شود.

هدف در محیط کشت استامید براث

محیط استامید براث برای افتراق باکتری های غیر تخمیر کننده گرم منفی به خصوص سودوموناس آئروژینوزا استفاده می شود.

شایع ترین باکتری های گرم منفی غیر تخمیری عبارتند از سودوموناس آئروژینوزا، آلکالیژنز فکالیس، اسینتوباکتر بائومانی

و استنوتروفوموناس مالتوفیلیا که عامل مهم عفونت های بیمارستانی هستند.

سودوموناس آئروژینوزا باسیل گرم منفی هوازی مطلق است که شایع ترین بیماری زای انسانی در جنس سودوموناس است.

به طور کلی سودوموناس باکتری هوازی است ولی اگر بعضی از مواد مانند نیترات یا آرژنین در اختیارش باشد

می تواند در شرایط بی هوازی هم رشد کند و از نیترات به عنوان پذیرنده ی نهایی الکترون استفاده می کند.

این باکتری از نظر بالینی بسیار اهمیت دارد.

سودوموناس آئروژینوزا توانایی تولید پیگمان های مختلف مانند پیوسیانین(آبی رنگ)،

پیووردین (سبز رنگ و فلور سنت)، پیوروبین( قرمز)، پیوملانین(سیاه) را دارد.

در بیماران دارای سوختگی سودوموناس آئروژینوزا به وفور دیده می شود.

محیط کشت استامید براث

(به علت فعالیت اگزوآنزیم s که دارای فعالیت ADP ریبوزیل ترانسفراز است.)

و یکی از اصلی ترین عوامل مرگ و میر در سوختگی،عفونت ها است که بهتر است از

افراد با وجود سوختگی ها در خانه پرستاری می شود و به بیمارستان منتقل نشوند.

(به راحتی می توان از محل سوختگی وارد خون شود.)

از شایع ترین عفونت های ایجاد کننده: تنفسی، ادراری،  پوستی،  عفونت چشم ، باکتریمی می توان اشاره کرد.

این باکتری عامل اصلی عفونت در بیماران فیبروز کیستیک (بیماری ژنتیکی است که در اثر اختلال عملکرد غدد مترشحه خارجی رخ می دهد).

این میکروارگانیسم در آب، خاک و مواد آلی درحال فساد در آب وجود دارد.

و باکتری ایی همه جایی (Ubiquitous ) است.

انتشار بالا دارد و در اکثر محیط ها به خصوص بیمارستان وجود دارد.

و می توانیم آنها را از آب و مواد شوینده بیمارستان ها جدا کینم (علتش این است که نیازمندی های اولیه ساده ای دارد).

با وجود فراوانی و تنوع فاکتور های ویرولانس و مقاومت بالایی که به آنتی بیوتیک ها دارد،

خوشبختانه یک پاتوژن فرصت طلب (Opportunistic) است.

(به همین دلیل عفونت بیمارستانی را ایجاد می کند.) و در افراد سالم با وجود فلور نرمال، بیماری ایجاد نمی کند.

(نسبت به بسیاری از آنتی بیوتیک ها مقاومت دارد.)

این باکتری در بیشتر دستگاه های بیمارستانی مانند دستگاه دیالیز، دستگاه ونتیلاتور و جاهای مرطوب دیگر مانند Toilet، Sink وجود دارد.

محدوده دمایی رشد باکتری 37_42 درجه سانتی گراد است.

همچنین حرکت مثبت ( Multi_unipolar) است و در نتیجه تست اکسیداز آن مثبت است.

این باکتری کلنی های مختلفی ایجاد می کند که بستگی به ماهیت کپسول دارد:

Large smooth colonies

Mucoid colonies

Small rough   colonies

سودوموناس هم عفونت حاد و هم عفونت مزمن ایجاد می کند.

برخی از فاکتور ها در عفونت های حاد و بعضی در عفونت های مزمن موثر هستند.

فاکتور های ویرولانسی که در آسیب بافتی نقش دارند و باعث سایتولیز سلول ها می شود و

منجر به عفونت حاد می شود و فاکتور هایی که باعث می شوند باکتری به سمت تشکیل بیوفیلم (Biofilm) برود.

(مثل تولید انواع Adhesive) که منجر به عفونت مزمن می شود.

بیوفیلم میکروبی ساختاری از جامعه میکروب ها می باشد که به صورت متصل به سطوح زنده یا غیر زنده یافت می شود.

تشکیل بیوفیلم هم در باکتری های گرم مثبت

( انتروکوکوس فکالیس، انتروکوکوس اورئوس، استافیلوکوکوس اپیدرمیس، استرپتوکوک، باسیلوس سوبتیلیس) و

هم در باکتری های گرم منفی ( اشریشیای کلای، کلبسیا پنومونیه، پروتئوس میرابیلیس، سودوموناس آئروژینوزا) دیده می شود.

مراحل تشکیل بیوفیلم

1_ اتصال به سطح

2_تشکیل لایه اولیه

3_تشکیل میکروکلنی های اولیه

4_تولید ماتریکس خارج سلولی

5_ تولید ساختار سه بعدی و فرم بالغ بیوفیلم

محیط کشت استامید براث

دو ویژگی مهم سودوموناس آئروژینوزا جهت افتراق از سایر سودوموناس به شرح زیر می باشد:

  • تولید پیگمان پیوسیانین برای نشان دادن متابولیسم اکسیداتیو است و
  • همچنین تبدیل نیترات را به نیتریت کاهش می دهد.
  • رشد در دمای 42 درجه امکان پذیر است.

سودوموناس آئروژینوزا قدرت پروتئولیتیکی قوی داشته و ژلاتین را به سرعت هیدرولیز می کند.

اوره آز (آنزیم تجزیه کننده اوره)، اکسیداز (آنزیم هایی هستند که واکنش های اکسیداسیون را کاتالیز می کنند.)،

کاتالاز (آنزیمی است که آب اکسیژنه را به اکسیژن و آب تجزیه می کند.)،

آرژنین دهیدرولاز (آنزیم تجزیه کننده آرژنین) همگی مثبت است.

پیوسیانین رنگدانه منحصر به سودوموناس آئروژیوزا است که

فعالیت هایی مانند تولید واسطه های نیتروژن فعال،

کنترل سیستم عدم تعادل الاستاز-آنتی الاستاز را به عهده دارد.

محیط کشت های به کار رفته جهت شناسایی سودوموناس آئروژینوزا مکانکی آگار،

اکسیداتیو-فرمانتیو (O-F)، تریپل شوگر آیرون آگار، مولر هیلتون آگار و SIM  می باشند.

در تست O_F  دو لوله مشابه داریم:

.یکی در شرایط هوازی و دیگری در شرایط بی هوازی که

با اضافه کردن روغن به سطح آن ایجاد می کنیم. چون باکتری سودوموناس هوازی اجباری است،

فقط در لوله با شرایط هوازی رشد کرده ( از قند استفاده کرده و محیط را اسیدی می کند و در نتیجه رنگ لوله از سبز به زرد تغیر می کند.)

اما انتروباکتریاسه، بی هوازی اختیاری است و در دو لوله رشد کرده و هر دو لوله زرد می شود.

( تست افتراقی سودوموناس و انتروباکتریاسه)

تست اکسیداز نشان دهنده وجود یا عدم وجود سیتوکروم اکسیداز در باکتری می باشد.

اگر تست مثبت باشد، صورتی می شود و تست اکسیداز سودوموناس مثبت می شود و انتروباکتریاسه منفی می باشد.

(تست افتراقی سودوموناس با انتروباکتریاسه).

توجه شود ایجاد پیگمان بر روی محیط مکانکی آگار با نتیجه منفی لاکتوز ،

تست اکسیداز مثبت و کشت بر روی محیط O_F  با نتیجه عدم رشد در محیط بی هوازی همگی آزمایش هایی هستند که

باعث افتراق باسیل های گرم منفی (سودوموناس) از انتروباکتریاسه می شود. سودوموناس آئروژینوزا به خیلی از آنتی بیوتیک ها مقاوم است .

ترکیبات محیط استامید براث

استامید 0/10 گرم مونو پتاسیم فسفات 73/0 گرم
سدیم کلراید 0/5 گرم منیزیوم فسفات 5/0 گرم
دی پتاسیم فسفات 39/1 گرم فنول رد 5/0 گرم

Ph نهایی در دمای 25 درجه سانتی گراد: 2/0±0/7

استامید به عنوان تنها منبع کربن و نیتزوژن، فنول رد به عنوان شناساگر است.

سدیم کلراید برای حفظ کردن حالت اسمزی محیط به کار می رود (هم چنین الکترون های ضروری را برای حمل و نقل تامین می کند.)،

فسفات پتاسیم (نمک های پتاسیم) ایجاد کننده ظرفیت بافری (تنظیم کننده pH ) و

هم چنین با فراهم کردن یونهای فلزی ضروری به عملکرد پروتئین کمک می کند.

آماده سازی محیط کشت استامید براث

5/2 گرم از پودر را در 950 میلی لیتر آب مقطر حل کنید.

(مقدار را بررسی کنید تا در صورت لزوم تنظیم شود.) و سپس داخل لوله بریزید و

در دمای 121 درجه و به مدت 15 دقیقه اتوکلاو کنید.

برای تشخیص سودوموناس آئروژینوزا در محیط یک حلقه را در دمای 37-35 درجه به مدت 24 ساعت انکوبه کنید

و پس از مدتی 2-1 قطره معرف نسلر (NESSLERS) را اضافه کنید.

( با یک یا دو حلقه رشد از یک محیط تازه فرضی تلقیح کنید.)

جهت مشاهده قیمت انواع محیط کشت های مارک QUELAB لطفا به صفحه لیست قیمت سایت ما مراجعه فرمایید.

برای مشاوره و اطلاعات بیشتر لطفا با کارشناسان ما تماس بگیرید.

تفاوت محیط کشت استامید آگار با استامید براث

از استامید آگار برای تعیین توانایی باکتری های گرم منفی غیر تخمیری برای از بین بردن استامید استفاده می شود

در حالیکه از استامید براث برای بررسی آب و فاضلاب به کار می رود.

 مشخصات فیزیکی محیط کشت استامید براث

محیطی کم آب، همگن و آماده است و رنگ بژ دارد.

تفسیر آزمایش

واکنش مثبت با تغییر رنگ لوله از قرمز نارنجی به قرمز بنفش نشان داده می شود.

حضور سودوموناس آئروژینوزا با تست آسپارژین مثبت و استامید براث مثبت تائید می شود.

 

  Acetamide deamination Growth Microorganisms
  ATCC 25922 Escherichia coil
  ATCC 29906 Proteus mirabilis
+ + ATCC 9027 Pseudomonas aeruginosa
+ + ATCC 27853 Pseudomonas aeruginosa
برای امتیاز به این نوشته کلیک کنید!
[کل: 1 میانگین: 5]