جهت مشاوره با شماره 09121223103 تماس حاصل فرمائید

انواع محیط های کشت کاربردی

تاریخ :اکتبر 8, 2019 نویسنده :آزاده

انواع محیط های کشت کاربردی در کشت سلول:

انواع محیط های کشت کاربردی در کشت سلول  DMEM,MEM و RPMI-1640 است.

انتخاب هرکدام از این محیط کشت ها برای کاربر بستگی به به نوع cell line و شرایط آزمایشگاه دارد .

محیط کشت DMEM محیط روتین است و برای اکثر سلولها استفاده میشود.

برای سلولهایی که کشت آنها برای اولین بار بررسی می شود بهتر است به مقالات معتبر ارجاع شود .

انواع محیط های کشت کاربردی  DMEM:

DMEM محیط کشت پایه برای رشد بسیاری از سلولها مانند فیبروبلاست اولیه , سلول های عصبی , گلیال , عضلانی و سلول های سرطانی است.

این محیط کشت همان محیط کشت پایه MEM که از مجموعه ای از اسیدهای آمینه ، ویتامین ها ، نمک های معدنی ، گلوکز و سرم به عنوان منبع رشد و هورمون ها تشکیل شده است.

غلظت گلوکز در محیط های کشت از 5.5 میکرومولار تا 25 میکرومولار متغیر است.

علاوه بر مواد مغذی ، این ماده به دلیل داشتن فنل رد به حفظ pH و اسمولالیته نیز کمک می کند و PH آن در حدود 7/4 است .

طبقه بندی انواع محیط های کشت کاربردی  بر اساس میزان گلوکز , فنل رد و l-glutamin صورت می گیرد:

گلوکز:

فرمولاسیون پایه DMEM به صورت (low glucose (1 g/l است.

ولی اغلب به صورت (high glucose (4.5 g/l استفاده می شود وبه دو گروه تقسیم میشود.

DMEM, high glucose,no glutamine

DMEM, low glucose,no glutamine

کاربرد محیط های  کشت DMEM در کشت سلول هایی است مانند  cancer cell line ,HEK 293 T cells

فنل رد:

فنل رد شباهت ساختاری با هورمون های استروییدی مانند استروژن دارد در ازمایش هایی که اثر گیرنده های استروژنی بررسی می شود از محیط کشت بدون فنل رد استفاده می شود.

With phenol red

Without phenol red

L-glutamin:

یکی از منابع اصلی انرژی در سلول هایی است که به سرعت تکثیر می شوند و میزان انرژی کربوهیدرات در محیط کافی نیست.

محدودیت های آن عبارتند از ناپایداری در محلول , تجزیه آن به آمونیاک که برای سلول سمی است و برای غلبه بر این مشکلات گلوتامین به فرم گلوتامات به محیط اضافه میشود.

L-Glutamin

 Glutamin-Free

Stable Glutamin

محیط کشت DMEM+Glutamax:

Glutamax فرم L- Alanyl-L-glutamine است و مانع جمع شدن آمونیاک در سلول می شود.

محیط کشت IMDM: 

فرم اصلاح یافته DMEM است و در مقایسه با آن مواد مغذی بیشتری دارد.

محیط کشت   Non essential amino acid )MEM  NEAA) :  

این محیط کشت شامل هفت آمینو اسید غیر ضروری است که  برای رشد بهینه سلول استفاده می شود.

اکثر سلولها اسید های امینه غیر ضروری را  از طریق چرخه کربس و گلیکولیز تولید میکنند و کاهش این امینو اسیدهای غیر ضروری

در محیط کشت منجر به تولید فراورده های جانبی به دلیل مصرف بیشتر گلوکز و گلوتامین می گردد و در رشد سلول تاثیر میگذارد .

 

 محیط کشت  RPMI 1640 :

محیط کشت مناسب برای رشد سلولهای لنفوسیت و مونوسیت های خون محیطی است.

دارای میزان بالایی گلوتاتیون , ویتامین های بیوتین , B12 و aminobenzoic acid PABA است که در محیط های کشت DMEM و MEM وجود ندارد.

محیط کشت بسیار غنی شده برای تکثیر و تراکم بالای سلولها ست .

محیط کشت RPMI 1640 فرم اصلاح یافته DMEM است و در مقایسه با آن  اسیدهای آمینه ، ویتامین ها و نمک های معدنی بیشتری دارد  .

دارای نیترات پتاسیم به جای نیترات آهن و ترکیبات HEPES و سدیم پیروات است.

تغییرات رنگ DMEM در PH مختلف

عکس فوق تغییرات رنگ DMEM در PH های مختلف را نشان میدهد که در PH حدودا 7/4 به رنگ قرمز-نارنجی در می آید و با کاهش PH و افزایش اسیدیته ی محیط به رنگ زرد تغییر می یابد.

 

شما هم نظر خود را در مورد این پست به ما بگوید

چهار × 2 =